生活饮用水标准之微生物的检测方法

检测依据：
     &nbs大腦p;GB/T 5750.2-2006 生身公活饮用水标准检验方法 水樣(yà日文ng)的采集和保存
   &行師nbsp;  GB/T 5750.12-土生2006 生活饮用水标准检验方法 微生物指标

本文主要包含
  &nbs長林p;1. 生活饮用水中的微生物指标
   站算2. 水樣(yàng)采集规则及注在對意事(shì)项
   3. 菌落总数、总大肠菌群、耐筆鐵热大肠菌群、大肠埃希氏菌的测定方法
   4.文都 對(duì)所检测水樣(yàng)的综合分析

生活饮用水中的微生物指标

菌落总数

水樣(yàng)在营养琼脂上有氧环境下，3弟黑7℃培养48h後(hòu)，所得1mL水樣(yàng)所含菌落街器的总数。

检测意义：作为一般性污染的指标，即评价被(bèi)检樣(yà光紙ng)品的微生物污染程度和安全性。水樣(yàng)菌落总数越多，說(shuō服放)明水被(bèi)微生物污染程度越严重，病原微生物存在的可能(néng)性越東醫大，但不能(néng)說(shuō)明污染的来源。

总大肠菌群

指一群在37℃培养24h能(nén通會g)發(fā)酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性樂美厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

检测意义：作为粪便污染的指标。水樣(yàng)总大肠菌群的含量，表明水被業裡(bèi)粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道(d唱化ào)致病菌存在的可能(néng)。哥笑

耐热大肠菌群

指一群在44-44.5℃培养24h能(néng)發(fā)酵乳糖，产酸产气，你靜需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌現靜。我國(guó)习惯上称之为“粪購哥大肠菌群"。

微生物指标常规检验流程图

一、水樣(yàng)采集

采樣(yàng)原则：所采集的樣(yàng)品具有代表性。長自

采樣(yàng)容器：不能(néng)是新的污染源：不吸收或吸附某些待测组分不与待测理劇组分發(fā)生反应。保证从采樣(y也放àng)到(dào)分析期间樣(yàng)品各组分的浓度民喝不發(fā)生改变。

微生物樣(yàng)品必须按一般无菌操作的基本雨下要求采集，并保证在运送、贮存過(guò)程中不受污染。

自来水水樣(yàng)：先將(jiāng)自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌再開(kāi)放中信水龙头使水流5min(經(jīng)常用水的購北水龙头放水1~3min)後(hò這行u)，采集水樣(yàng)于无菌玻璃瓶，约占瓶容量80%，以便摇匀水樣河見(yàng)。

水源水水樣(yàng)：选有代表性的地点及可疑地方，一般距水面(miàn)下10-15cm采女時集，采樣(yàng)後(hòu)在水中改好(hǎo)盖子，再从水中取出。

注意事(shì)项

1. 严格无菌操作。

2. 做好(hǎo)标记：采得水樣(yàng)後(hòu)应立即记录水樣(yàng)名称、費金地点、時(shí)间等内容。

3. 从速送检。水樣(yàng)从采集到(dào)检验不应超內工過(guò)2h，在4℃下保存不应超過(guò)24h。

二、菌落总数测定

所需培养基和试剂：营养琼脂、9mL无菌生理盐水管。

自来水水樣(yàng)检测

操作步骤：

1. 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水樣(yàng)，注樹唱入灭菌平皿中。

2. 倾注约15mL已融化井冷却到(dào錯科)45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿；使水与培女水养基充分混匀（每次检验時(shí)应做一平行接種(要又zhǒng)，同時(shí)另用一个平只倾注营养琼筆日脂养基作为空白對(duì)照）

3. 待冷却凝固後(hòu)，翻转平皿山小，使底面(miàn)向(xiàng)上，置于36℃±1℃行視培养箱内培养48h，進(jìn)行菌落计数，即为見件水樣(yàng)1mL中的菌落总数。

4. 培养完成(chéng)後(hòu)，用眼睛直接观察，土頻必要時(shí)用放大镜检查，以防遗雪訊漏。

结果分析与报告：

计算平均菌落数，若菌落总数(CFU/mL)当检樣(民科yàng)的菌落数为1~100時(shí)，按实有数报告；大于1答讀00時(shí)，采用二位有效数字报告。

國(guó)家标准(GB5749-市如2006)规定生活饮用水菌落总数每毫升不得超過(guò做鄉)100个。

水源水检测

操作步骤：

1. 以无操作方法吸取1mL充分混匀的水，注入盛有9m行他L灭菌生理盐水的试管中，混匀成(chéng)1:10稀释液。匠吧

2. 吸取1:10的稀释液1mL，注入盛有9mL灭菌生理盐在離水的试管中，混匀成(chéng)1:100稀师液，按同法資物依次稀释成(chéng)1:1謝我000，1:1000释液等备用（如此递增稀释一次，必须更换一支1m灭菌管）。

3. 然後(hòu)用无菌极管取稀也慢释的水樣(yàng)和2个~3个适释度的水樣(yàng)1mL，分别注入灭事呢菌平皿内。之後(hòu)操作同自来水水樣(yàng)的市遠检验步骤。

结果分析与报告：计算平均菌落数，首先选择平均菌落在30~300之间者進(jìn)行计算。

一般水源水中菌落总数与水清洁程度的关系匠要：

注意事(shì)项

1. 菌落总数测定中，应选择合适的稀释度進(jìn)行(生活饮劇爸用水，國(guó)家标准规定每毫升不得超過(guò)100个，因此以直接視快吸取1毫升到(dào)平板進(jìn)行培养)

2. 各稀释管、相应半皿做好(hǎo)标记。包括：水樣(yàng)名称、稀释媽友度、時(shí)间、小组。

3. 严格无菌操作進(jìn)行水樣(yàng)稀释時(shí)，每一腦雨稀释度均需更换吸管。

4. 倾注時(shí)，要注意营养琼脂民道的温度。

5. 倾入琼脂後(hòu)要混匀，待琼脂凝固後(hòu)倒置培养。

三、总大肠菌群测定

所需培养基和试剂：乳糖蛋白胨培养液、双料乳糖蛋白機場胨培养液、伊红美蓝培养基。

多管發(fā)酵法步骤：

初步發(fā)酵试验：采用乳糖蛋白培养液36℃±1℃培养24h观察产大村酸产气情况。

平板分离：對(duì)阳性管培养物，接種(zhǒng)于樹輛伊红美蓝培养基观察菌落特征，并進(jìn)醫光行革兰氏染色和镜检。

复發(fā)酵证实试验：對(duì)典型和可疑菌落，接種(zhǒng)于乳糖蛋白胨培养液，進(jìn)飛師行复發(fā)酵证实试验。

结果报告(MPN)：根据 GB 5750.12-2006 所附检索表报告结果。

四、耐热大肠菌群测定

所需培养基和试剂：乳糖蛋白胨培养液、EC肉汤、伊红美蓝培养基

多管發(fā)酵法步骤：

初步發(fā)酵试验：采用乳糖蛋白培养液36℃&plus影請mn;1℃培养24h观察产酸产气情况。

耐热培养：阳性管接種(zhǒng)在EC肉汤管中，44但服.5℃培养24h观察产酸产气情年討况。

平板培养：阳性管接種(zhǒng)在EMB平板上，36℃±1℃培养24h低要。

结果报告(MPN)：根据 GB 5750.12-2006 所附检索表报告结果。

五、大肠埃希氏菌测定

所需培养基和试剂：EC-MUG培养基

多管發(fā)酵法步骤：

耐热培养：將(jiāng)总大肠菌群初發(fā)酵中产酸或产气的管進件林(jìn)行大肠埃希氏菌检测，接種(zhǒng)此車舊类试管中的液体到(dào)EC-MUG兒我管中，在培养箱或恒温水浴中44.5℃水兒培养24h。如使用恒温水浴，在接種(zhǒng)後(hòu)30min内進章草(jìn)行培养，使水浴液面(miàn)超過(guò)EC-MUG管的液面(西兵miàn)。

结果报告(MPN)：
   將(jiāng)培养後(h新信òu)的EC-MUG管在暗处用366n件農m紫外灯照射，如有蓝色荧光，则表明水樣(相得yàng)中含有大肠埃希氏菌。
   计算EC-MUG阳性管数，麗習根据GB 5750.12-2006所附检索表报告结果。