干货！微生物检测知识汇总（接種說煙(zhǒng)、分离纯化和培养、微生物常规鉴定技术）

接種(zhǒng)、分离纯化和培养技术

一、接種(zhǒng)
將(jiāng)微生物接到(dào)适于兵在它生長(cháng)繁殖的人工培养基上或活的生物体可文内的過(guò)程叫(jiào)做接種(zhǒng)。

接種(zhǒng)和分离工具
1．接種(zhǒng)针 2.接種(zhǒng)环 3.接種(zhǒng)钩 4.5.玻璃涂棒 6.接種(zhǒng)圈 7.接種(zhǒng)锄 8.小解剖刀

常用的接種(zhǒng)方法有以下几種(zhǒng)：
１）划线接種(zhǒng) 這(zhè)是常用的接種(zhǒng)方法。即在固体培养基表面(miàn)作著銀来回直线形的移动，就(jiù)可达到(dào)接種(zhǒng)的作用。常玩影用的接種(zhǒng)工具有接種(zhǒng)环，接種(zhǒng)针等睡靜。在斜面(miàn)接種(zhǒ他區ng)和平板划线中就(jiù)常用土電此法。

２）三点接種(zhǒng) 在研究霉菌形态時(shí)常用此法。此法即把少量的微生物接低在種(zhǒng)在平板表面(miàn)上，成(女謝chéng)等边三角形的三点，让它各自独立形坐樹成(chéng)菌落後(hòu)，来观察、研究它们的形态。除三点外，也就風有一点或多点進(jìn)行接種(子快zhǒng)的。

３）穿刺接種(zhǒng) 在保藏厌氧菌種(zhǒng)或研究微生物的动力時(shí)常采用喝計此法。做穿刺接種(zhǒng)時(shí)，用的接種(zhǒng)工具是接司村種(zhǒng)针。用的培养基一般是半能錯固体培养基。它的做法是：用接種(zhǒng)针蘸取少量的菌種(zh雜空ǒng)，沿半固体培养基中心向(xi開水àng)管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能(néng)运动，则在穿是藍刺线周围能(néng)够生長(chá了來ng)。

４）浇混接種(zhǒng) 该法是將(jiāng)待接的微生物先放入培工中养皿中，然後(hòu)再倒入冷却至45°c左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，這(zhè)樣(yàng)菌液就(jiù)达到鐵飛(dào)稀释的目的。待平板凝固之後(hòu)，置合适温度下培养，就(ji了件ù)可長(cháng)出单个的微生物菌落。

５）涂布接種(zhǒng) 与浇混接種(zhǒng)略有不同，就(jiù)是先倒好(hǎo)輛訊平板，让其凝固，然後(hòu)再將(白外jiāng)菌液倒入平板上面(miàn)，迅速用涂布棒在從很表面(miàn)作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就(jiù)可作內長(cháng)出单个的微生物的菌落。

６）液体接種(zhǒng) 从固体培养基中將(jiāng)菌友來洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管將(jiāng)信區菌液接至液体培养基中，或从液体培养物通西中將(jiāng)菌液移至固体培养基中，都(d呢開ōu)可称为液体接種(zhǒng)。

７）注射接種(zhǒng) 该法是用注射的方法將(jiāng)待接的微生物转接至爸制活的生物体内，如人或其它动物中，常件制见的疫苗预防接種(zhǒng)，就(jiù)是用注射接種(zhǒng)，接入人請科体，来预防某些疾病。

８）活体接種(zhǒng) 活体接種(zhǒng)是专门用于視技培养病毒或其它病原微生物的一種(zhǒng)方法畫科，因为病毒必须接種(zhǒng)于活的生物体内才能(néng)生長(c飛呢háng)繁殖。所用的活体可以是東影整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾媽土等；也可以是發(fā)育的鸡胚。接種(zhǒng)的方式是注射，也可以是拌料飛木喂养。

无菌操作
培养基經(jīng)高压灭菌後(hòu)，用經(jīng)過(gu話下ò)灭菌的工具（如接種(zhǒ頻學ng)针和吸管等）在无菌条件下筆用接種(zhǒng)含菌材料（如樣(yàng)品、菌苔或菌悬液等）吧用于培养基上，這(zhè)个過(guò)雜遠程叫(jiào)做无菌接種(zhǒng)操作。在实验室检验中的各種(zhǒn路報g)接種(zhǒng)必须是无菌操作。
(1)接種(zhǒng)灭菌 (2)開(kāi)启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起(qǐ)菌苔 (5)接種(zhǒng) (6)塞好(hǎo)棉塞。

二、分离纯化
含有一種(zhǒng)以上的微商快生物培养物称为混和培养物（mixed culture）。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那麼(me)從媽這(zhè)个菌落称为纯培养（pure
culture）。在進(jìn)行菌種(zhǒng)鉴定時(shí)，所用的微生物在喝一般均要求为纯的培养物。得到(dào)纯培养的過(guò)程称为分离纯化，方雪拍法有许多種(zhǒng)。

１、倾注平板法
首先把微生物悬液通過(guò)一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好(h黑舊ǎo)的保持在40-50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然後(放地hòu)把這(zhè)混合液倾注到(dào)无菌的培养討地皿中，待凝固之後(hòu)，把這(zhè雜章)平板倒置在恒箱中培养。单一细胞經(jīng)過(guò)多次增殖後(h雨購òu)形成(chéng)一个菌落，取单个菌落制成(c喝風héng)悬液，重复上述步骤数次，便可得到(dào)纯培养物。

２、涂布平板法
首先把微生物悬液通過(guò)适当的稀释如討，取一定量的稀释液放在无菌的已經(jīng)凝固的营养琼脂平板海水上，然後(hòu)用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地兵黃涂布在培养基表面(miàn)上，經(jīng)恒温培养便可以得熱金到(dào)单个菌落。

３、平板划线法
简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接種大務(zhǒng)环取培养物少许在平板上進算工(jìn)行划线。划线的方法很多，常见的比较容易出舞很现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法看很等。当接種(zhǒng)环在培养基表面(近新miàn)上往後(hòu)移动時(shí)，接種(zhǒng)环畫媽上的菌液逐渐稀释，後(hòu)在所划的线上分散著(zh歌拿e)单个细胞，經(jīng)培养，每一个謝會细胞長(cháng)成(chéng)一个菌落。

４、富集培养法
富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只林藍让所需的微生物生長(cháng)，在這(高錢zhè)些条件下，所需要的微生物能(néng男花)有效地与其他微生物進(jìn)行竞争，在生長(cháng)能(néng舞林)力方面(miàn)远远超過(guò)其他微生物。如果有金要分离一些专性寄生菌，就(jiù)必须把樣(yàng)品接種(zhǒng)到(間家dào)相应敏感宿主细胞群体中，子銀使其大量生長(cháng)。通過(guò)多次重复移種(zhǒng個自)便可以得到(dào)纯的寄生菌。

５、厌氧法
在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以吧地利用装有原培养基的试管作为培养容器，湖媽把這(zhè)支试管放在沸水0浴中加热数分钟，以便逐出培养基中的溶解氧。然動近後(hòu)快速冷却，并進(jìn)行接種(zhǒng兒些)。接種(zhǒng)後(hòu)，加入无菌的石蜡花窗于培养基表面(miàn)，使培养基与空气隔绝拍煙。另一種(zhǒng)方法是，在商一接種(zhǒng)後(hòu)，利用n2或co2取代培养基中的气体，然後(hòu)在火焰上把试管生好口密封。有時(shí)为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离的樣(了我yàng)品接種(zhǒng)于培养基上，然後(hòu)再把培养皿放在*密封通算的厌氧培养装置中。

三、培养
1、根据培养時(shí)是否需要氧气，可分为好(hǎo)氧培养和厌購見氧培养兩(liǎng)大类。
好(hǎo)氧培养：也称“好(hǎo)气培养”。就(jiù)是說(shuō)這(zhè)種(zhǒng)如飛微生物在培养時(shí)，需要有氧气加入，否则就(j亮分iù)不能(néng)生長(cháng)良好(hǎo)。在实验室中，斜國都面(miàn)培养是通過(guò)棉花塞从外界获了線得无菌的空气。三角烧瓶液体培养多数是通過(guò)摇床振荡，使外界的空气*森拍地進(jìn)入瓶中。

厌氧培养：也称“厌气培养”。這(zhè)类微生物在培养時(s用事hí)，不需要氧气参加。在厌氧微生物的海上培养過(guò)程中，重要的一点就(jiù)是要裡術除去培养基中的氧气。一般可采用下列几種(zhǒng)方法：
a.降低培养基中的氧化還(hái)原电位：常將(jiāng)還(hái)哥兵原剂如谷胱甘肽、硫基醋酸盐等，加入到(dào)培养基中，便可达到(dào)目討子的。有的將(jiāng)一些动物的死的或活的组织如牛有門心、羊脑加入到(dào)培养基中，也可适合厌氧菌的生西吧長(cháng)。
b.化合去氧：這(zhè)也有很多方法，主要有：用焦下通性沒(méi)食子酸吸收氧气；用磷吸收氧气；用好(hǎo)氧菌与鐵得厌氧混合培养吸收氧气；用植物组织如發(fā)芽的種(zhǒng)子吸收氧气；廠呢用产生氢气与氧化合的方法除氧。
c.隔绝阻氧：深层液体培养；用石蜡油封存；半固体費去穿刺培养。
d.替代驱氧 用二氧气碳驱代氧气；用氮气驱代氧气；用路影真空驱代氧气；用氢气驱代氧气；用混和气体驱代氧气。
２、根据培养基的物理状态，可分为固体培养和液体培养兩(快個liǎng)大类。

微生物常规鉴定技术

一、形态结构和培养特性观察
１、微生物的形态结构观察主要是通過(guò)染色，在显微镜下對得生(duì)其形状、大小、排列方式、细胞结廠自构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、跳看芽孢等）及染色特性進(jìn)行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根秒紅据不同微生物在形态结构上的不同达到(dào)区别、鉴定微生物的目的。

２、细菌细胞在固体培养基表面(miàn)形成家能(chéng)的细胞群体叫(jiào)菌落（colony）。不同微生物在某種(zhǒn見樹g)培养基中生長(cháng)繁殖，所形成(chéng)的菌落特征有很大差异自風，而同一種(zhǒng)
的细菌在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。以此可以對(duì)國河不同微生物加以区别鉴定。因此，微生物培养特性的观察也是微生物检船我验鉴别中的一项重要内容。

１）细菌的培养特征包括以下内容：在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（是水溶性色素還(房日hái)是脂溶性色素）、光泽度、透長懂明度、质地、隆起(qǐ)形状、边缘特征及迁移性等。玩刀在液体培养中的表面(miàn)生長(cháng)情况（菌膜、环）混浊度及沉術件淀等。半固体培养基穿刺接種(zhǒng)观察运动、扩散情况。）

常见的细菌的培养特征
1.点状 2.圆形 3.丝状 4.不规则形 5.假根状 6.纺锤状 7.扁平 8.隆起(qǐ) 9.凸起(qǐ)10.垫状 11.脐状 12.边缘整齐 13.波状 14.裂片状 15.啮蚀状 16.丝状 17.卷發(fā)状 18.丝线状 19.刺毛状 20.串珠状 21.疏展状 22.树根状 23.假根状 24.丝状 25.串珠状 26.乳头状 27.绒毛状 28.树根状 29.量杯状 30.萝卜状 31.漏斗状 32.囊状 33.层状 34.絮状 35.环状 36.蹼状 37.膜状。

２）霉菌酵母菌的培养特征：
大多数酵母菌沒(méi)有丝状体，在固体培养基上形成(chéng)時和的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大且厚。液体培养也和细菌相似，有均匀花關生長(cháng)、沉淀或在液面(miàn)形成(c理煙héng)菌膜。
霉菌有分支的丝状体，菌丝粗長(cháng)，在条件适宜的培养基裡(lǐ)，菌丝窗司无限伸長(cháng)沿培养基表面(miàn)街山蔓延。霉菌的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝都(dōu)常带有不同颜色，因鐵唱而菌落边缘和中心，正面(miàn外大)和背面(miàn)颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色樹員，气生菌丝无色，基内菌丝褐色。霉菌在固体培养表面(miàn)形成(chén畫市g)絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落。

二、生理生化试验
微生物生化反应：指用化學(xué)反应来测定微生物的代谢产物，明作生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面(miàn)不易区别的微討朋生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。

微生物检验中常用的生化反应有：
１、糖酵解试验
不同微生物分解利用糖类的能(néng)力有很大差异，或能(nén化訊g)利用或不能(néng)利用，能(néng)利用者光務，或产气或不产气。可用指示剂及發(fā)酵管检验。
试验方法：以无菌操作，用接種(zhǒng)针或环移取纯培养物少许議友，接種(zhǒng)于發(fā)酵液体培养基文為管，若为半固体培养基，则用接種(zh算兒ǒng)针作穿刺接種(zhǒng)。接種(zhǒng)後(hòu)，置36±1.0℃培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡風照，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体務場培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微女村小气泡，有時(shí)還(hái)可看出接種(zhǒng)菌有這線无动力，若有动力、培养物可呈弥散生長(cháng)。
本试验主要是检查细菌對(duì)各種(zhǒng)糖、醇和糖苷等的發(fā要我)酵能(néng)力，从而進(jìn)行各種(用朋zhǒng)细菌的鉴别，因而每次试验，常需同時(shí)接種(zh又樂ǒng)多管。一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百裡(lǐ)蓝和an-drade指示剂。

２、淀粉水解试验
某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解後(hò山我u)，遇碘不再变蓝色。
试验方法：以18~24h的纯培养物，涂布接種(zhǒng)于淀粉琼脂斜面銀樹(miàn)或平板（一个平板可分区接種(zhǒng)，试验数種來窗(zhǒng)培养物）或直接移種(zhǒng)于淀粉肉綠工汤中，于36±1℃培养24~48h，或于20℃培养5天。然後(hòu)將(jiāng)碘试剂直接滴浸于培养表面(miàn小少)，若为液体培养物，则加数滴碘试剂于討新试管中。立即检视结果，阳性反应（淀粉被(bèi)分解）为琼脂。培养基呈深弟地蓝色、菌落或培养物周围出现无色制放透明环、或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透紙他明环或肉汤呈深蓝色。
淀粉水解系逐步進(jìn)行的過(guò)程，因而试验结果与小公菌種(zhǒng)产生淀粉酶的能(néng)力、培养時(shí)间，培來海养基含有淀粉量和ph等均有一定关系。培养基ph必须为中性或微酸性，以ph7.2适。淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用時(shí)制备为妥。

３、v-p试验
某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能(néng物雨)分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，遠票脱羧成(chéng)乙酰甲基甲醇，車能後(hòu)者在强碱环境下，被(bèi)空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰湖答与蛋白胨中的胍基生成(chéng)红色化合物，称v－p（+）反应。
试验方法：
１）o’meara氏法：將(jiāng)试验菌接種(zhǒng)于通資自用培养基，于36±1℃培养48h，培养液1ml加o’meara试剂（加有0.3%肌酸creatine或肌酸酐creatinine的40%氢氧化钠水溶液）1ml，摇动试管1~2min，静置于室温或36±1℃恒温箱，若4h内不呈现伊红、即判定为阴性。亦有主张在48~50℃水浴放置2h後(hòu)判定结果者。
２）barritt氏法：將(jiāng)试验菌接種(zhǒng)于通用培养基，于36±1℃培养4天、培养液2.5ml先加入5°cα萘酚（2-na-phthol）纯酒精溶液0.6ml，再加40%氢氧化钾水溶液0.2ml，摇动2~5min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或36±1℃恒温箱，如2h内仍不显现红色、可判定为阴性。
３）快速法：將(jiāng)0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面(miàn)培养物聽綠一接種(zhǒng)环，乳化接種(zhǒng)于其中，加入5%α-萘酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴，振动後(hòu)放置5min，判定结果。不产酸的培养物不能(né相的ng)使用。
本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。在用于芽胞杆菌和葡文訊萄球菌等其它细菌時(shí)，通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生黑南，故应省去或以氯化钠代替。

４、甲基红（methyl red）试验影紙
肠杆菌科各菌属都(dōu)能(néng)雜森發(fā)酵葡萄糖，在分解葡萄糖過(guò)程中产生丙酮酸，進愛刀(jìn)一步分解中，由于糖代谢綠書的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可火樹使培养基ph值下降至ph4.5以下，使甲基红指示剂变红。
试验方法：挑取新的待试纯培养物少许，接種(zhǒn花放g)于通用培养基，培养于36±1℃或30℃（以30℃较好(hǎo)）3~5天，从第二天起(qǐ)，每日取培养液1ml，加甲基红指示剂1~2滴，阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色。迄至發(從哥fā)现阳性或至第5天仍为阴性、即可判定结果。
甲基红为酸性指示剂，ph范围为4.4~6.0，其pk值为5.0。故在ph5.0以下，随酸度而增强黄色，在ph5.0以上，则随碱度而增强黄色，在ph5.0或上下接近時(shí)，可能(néng)变色不够明西東显，此時(shí)应延長(cháng)培养時(shí)间，重复试验。

５、靛基质（imdole）试验
某些细菌能(néng)分解蛋白胨中的色氨國對酸，生成(chéng)吲哚。吲哚的存在可用可媽显色反应表现出来。吲哚与對(duì)二甲基氨基苯醛结合，形成(chéng)玫瑰北對吲哚，为红色化合物。
试验方法：將(jiāng)待试纯培养物小量接種(zhǒng)于试验培养基管，于36±1℃培养24h時(shí)後(hòu)，取约2ml培养液，加入kovacs氏试剂2~3滴，轻摇试管，呈红色为阳性，或先加少量 （金數yi）醚（mi）或二甲苯，摇动试管以提取和浓缩靛基质，待其浮于中短培养液表面(miàn)後(hòu還雨)，再沿试管壁徐缓加入kovacs氏试剂数滴，在接触面(miàn)呈红色，即为阳性。
实验证明靛基质试剂可与17種(zhǒng)不的靛基质化合物作用而产生阳性反应，若先用二甲苯或 （yi）問喝醚（mi）等進(jìn)行提取，再加试剂，则只有靛基质或5-甲基靛基质在溶剂中呈现红色，因而结果更为可靠坐視。

６、硝酸盐（nitrate）還(hái)習機原试验
有些细菌具有還(hái)原硝酸盐的能(néng)力，可將(jiāng)硝多家酸盐還(hái)原为亚硝酸盐、氨或氮气等。亚硝酸盐的存在可用硝酸试剂检验。
试验方法：临试前將(jiāng)试剂的a（磺胺酸冰醋酸溶液）和b（α－萘胺乙醇溶液）试液各0.2ml等量混合、取混合试剂约0.1ml、加于液体培养物或琼脂斜面(miàn)培养物表面(miàn)，立即從拍或于10min内呈现红色即为试验阳性，若无红色出现则为阴性。用還地α-萘胺進(jìn)行试验時(shí)，阳性红笑輛色消退很快、故加入後(hòu)应立從舞即判定结果。進(jìn)行试验時(票書shí)必须有未接種(zhǒng)的培养物從基管作为阴性對(duì)照。α-萘胺具有致癌性、故使用時(shí)应加注意。

７、明胶（gelatin）液化试验
有些细菌具有明胶酶（亦称类蛋白水解酶），能(néng)將(jiāng)喝訊明胶先水解为多肽，又進(jìn)一步水解为氨基酸科時，失去凝胶性质而液化。
试验方法：挑取18~24h待试菌培养物，以较大量穿刺接種(z購下hǒng)于明胶高层约2/3深度或点種(zhǒng)于平板培养基。于20~22℃培养7~14天。明胶高层亦可培养于36±1℃。每天观察结果，若因培养温度高而使明胶本身液化時(shí)应不加摇动、上也静置冰箱中待其凝固後(hòu)、再观察其內機是否被(bèi)细菌液化，如确被(bèi)液司街化，即为试验阳性。平板试验结果的观察为在培养基平板点種(zhǒng人電)的菌落上滴加试剂，若为阳性，10~20min後(hòu)，菌落周围应出现清晰带环放弟。否则为阴性。

８、尿素酶（urease）试验
有些细菌能(néng)产生尿素酶，將(jiāng)尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿裡作素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否北紅存在，细菌均能(néng)合成(chéng)此酶。其活性林議适ph为7.0。
试验方法：挑取18~24h待试菌培养物大量接種(zhǒng)于液体培养基管中，摇討兒均，于36±1℃培养10，60和120min，分别观察结果。或涂布并穿刺接種(zhǒng)于琼脂斜面(生懂miàn)，不要到(dào)达底部，留底部作变色對(duì)照。銀制培养2，4和24h分别观察结果，如阴性应继续培养至4天，作终判定，变为粉红色为阳性。

９、氧化酶（oxidase）试验
氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先風化使细胞色素c氧化，然後(hòu)此氧化型细胞色素c再使對(duì)苯二胺氧化，产生颜色反应。
试验方法：在琼脂斜面(miàn)培养物上或血琼脂平板菌落上滴加试剂1~2滴，阳性者kovacs氏试剂呈粉红色~深紫色，ewing氏改進(jìn)试剂呈蓝色。阴性者无颜色改变。应在数分钟内判定试验志土结果。

10、硫化氢（H2S）试验
有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含學化硫化合物，而产生硫化氢气体，硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成(chén都去g)黑色沉淀物。
试验方法：在含有流代流酸钠等指示剂的培养基中，沿鐘站管壁穿刺接種(zhǒng)，于36±1℃培养24~28h，培养基呈黑色为阳性。阴性应继续培养至6天。也可用醋酸铅纸条法：將(jiāng)待试菌接種(zhǒng)校暗于一般营养肉汤，再將(jiāng)醋酸铅纸条麗訊悬挂于培养基上空，以不會(huì)被(bèi)溅湿为适度；用管塞压女現住置36±1℃培养1~6天。纸条变黑为阳性。

11、三糖铁（TSI）琼脂试验
试验方法：以接種(zhǒng)针挑取待试菌可疑菌落或纯習內培养物，穿刺接種(zhǒng)并涂布于斜很紅面(miàn)，置36±1℃培养18~24h，观察结果。
本试验可同時(shí)观察乳糖和蔗糖發(fā)酵产酸或产酸产气（变黄）；产暗理生硫化氢（变黑）。葡萄糖被(bèi)分解产酸可使斜面(mià藍做n)先变黄，但因量少，生成(chéng)的少量酸，因接什輛触空气而氧化，加之细菌利用培养北我基中含氮物质，生成(chéng)碱性产物，故使斜面(miàn道坐)後(hòu)来又变红，底部由于是在厌氧状态下鐘理，酸类不被(bèi)氧化，所以仍保持黄色。

12、硫化氢-靛基质-动力（sim）琼脂试验
试验方法：以接種(zhǒng)针挑取菌落或纯养物穿刺接種(zhǒng光中)约1/2深度，置36±1℃培养18~24h，观察结果。培养物呈现黑色为硫化氢阳性，混浊或沿穿刺线店快向(xiàng)外生長(cháng)为有动力，然後(hòu)加kovacs氏试剂数滴于培养表面(miàn)，静置10min，若试剂呈红色为靛基质阳性。培养基未接種(zh報讀ǒng)的下部，可作为對(duì)照。
本试验用于肠杆菌科细菌初步生化筛选，与三糖铁琼脂等联合使用可显著提商購高筛选功效。

三、血清學(xué)试验
血清學(xué)反应是指：相应的抗原与抗体在体外一定条件下去農作用，可出现肉眼可见的沉淀、凝集现象。在食品微生物检验中，訊件常用血清學(xué)反应来鉴定分离到(dào)坐務的细菌，以终确认检测结果。

血清學(xué)反应的一般特点：
1)抗原体的结合具有特异性，当有共司西同抗原体存在時(shí)，會(huì)出现站個交叉反应。
2)抗原体的结合是分子表面(miàn)的结合，這(zhè)種(zhǒng)结現自合虽相当稳定，但是可逆的。
3)抗原体的结合是按一定比例進(jìn暗森)行的，只有比例适当時(shí)，才能(néng)出现可见反应。媽新
4)血清學(xué)反应大体分为兩(liǎng)个阶段進金是(jìn)行，但其间无严格界限。阶段为抗原体特异性结合阶段，反应速度很快，只需訊是几秒至几分钟反应即可完毕，但不出现肉眼可见现象。懂民第二阶段为抗原体反应的可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合呢冷反应等。反应速度慢，需几分、几十件他分以至更長(cháng)時(shí)间。而且，在第二阶段反应中科志，电解质、ph、温度等环境因素的变化，都(dōu)直接影東拍响血清學(xué)反应的结果。
习惯上將(jiāng)經(jīng)典的血清學(x都房ué)反应分三種(zhǒng)类見廠别：凝集反应、沉淀反应和补体结合反应。

１、凝集反应
颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参与下所風木形成(chéng)的肉眼可见的凝集现象，称为凝集兵我反应（agglutination reaction）。其中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。在该反姐笑应中，因为单位体积抗体量大，做定量实验時(和錢shí)，应稀释抗体。
１）直接凝集反应
颗粒性抗原与相应抗体直接结合所出现的反应，称为直接凝集反应(direct agglution 個靜reaction)。
a.玻片凝集法。是一種(zhǒng)常规的定性试验方法。原理是用小報已知抗体来检测未知抗原。常用于鉴定菌種(zhǒng)、血型司門。如將(jiāng)含有痢疾杆菌抗体的血清与謝輛待检菌液各一滴，在玻片上混匀，数分種(zh個不ǒng)後(hòu)若出现肉眼可见的凝集块雪城，即阳性反应，证明该菌是痢疾杆菌。此法快速、简便，但不能(nén師吃g)進(jìn)行定量测定。
b.试管凝集法。是一種(zhǒng)定量试验方法。多用已知抗原来見新检测血清中有无相应抗体及其含量。常用于协助诊断某些传染病及進北通(jìn)行流行病學(xué)调查。如肥达氏反应就(jiù)是诊断討術伤寒、付伤寒的试管凝集试验。因为要测定機服抗体的含量，故將(jiāng)待站道检查的血清用等渗盐水倍比稀释成(ché爸家ng)不同浓度，然後(hòu)加入等量抗原，37℃或56℃，2~4小時(shí)观察，血清高稀释度仍有明显凝集现象的，为该抗血清的凝集效价。

２）间接凝集反应
將(jiāng)可溶性抗原（抗体）先吸附在一種吃短(zhǒng)与免疫无关的，颗粒状微球表面(miàn)，然後去畫(hòu)与相应抗体（抗原）作用，在有电解质存在的条件下，即可發(fā)生凝集市影，称为间接凝集反应(indirect agglu是藍tination)。由于载体增大了可溶性抗原的反应面(miàn)积。当载体上有少量抗原与自都抗体结合。就(jiù)出现肉眼可见的反应，敏感性冷白很高。

2、沉淀反应
可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在下，經(jīng)過(g話機uò)一定時(shí)间，形成(ch湖議éng)肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反鐘謝应（precipitation）。反应中的抗原称为沉淀原，抗体为沉淀素。由于在单位体积内抗原量大，为了不使歌農抗原過(guò)剩，故应稀释抗原，并以抗原的稀释度作为沉淀反应的海報效价。
１）环状沉淀反应：是一種(zhǒng)定性试验方法，可用已知抗体草唱检测未知抗原。將(jiāng)已知抗近在体注入特制小试管中，然後(hòu)沿管壁徐徐加入等量抗原，如抗原与如站抗体對(duì)应，则在兩(liǎng)液界面(miàn)出問熱现白色的沉淀圆环。

２）絮状沉淀反应：將(jiāng)已知抗原与抗体在试管（煙街如凹玻片）内混匀，如抗原抗体對(船很duì)应，而又二者比例适当時(shí)，會(huì)出现我西肉眼可见的絮状沉淀，此为阳性反应。

３）琼脂扩散试验：利用可溶性抗原抗体在半固体琼脂内扩散，若抗原抗体對(du多見ì)应，且二者比例合适，在其扩散的月自某一部分就(jiù)會(huì)出现白色的沉淀线。每對(業就duì)抗原抗体可形成(chéng)一条沉淀线。有几對(du厭西ì)抗原抗体，就(jiù)可分别形成(c數看héng)几条沉淀线。琼脂扩散可空上分为单向(xiàng)扩散和双向(xiàng著們)扩散兩(liǎng)種(zhǒng)类型。单向(xiàng)扩散是購話一種(zhǒng)定量试验。可用于免疫蛋白含量的测定。而双向(xiàng)扩高議散多用于定性试验。由于方法简便易行，常用于测定分公資析和鉴定复杂的抗原成(chéng)分。

3、补体结合反应
补体结合反应(complement fix說報ation reaction)是在补体参与下，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应商門。补体无特异性，能(néng)与任何一组抗原抗体复合物科費结合而引起(qǐ)反应。如果补体与绵羊红细胞、溶血素的复合物结合，就(水場jiù)會(huì)出现溶血现象，如果与细菌及朋弟相应抗体复合物结合，就(jiù)會新窗(huì)出现溶菌现象。因此，整个试验女醫需要有补体、待检系统（已知抗体或不也抗原、未知抗原或抗体）及指示系统（绵羊细胞和地訊溶血素）五種(zhǒng)成(chéng)份参加空些。
其试验原理是补体不单独和抗原或抗体结合。如果出现溶菌，是补体与待检系習討统结合的结果，說(shuō)明抗原抗体是相對雜開(duì)应的，如果出现溶血，說(shuō)明抗原抗体不相對(d船慢uì)应。此反应操作复杂，敏感訊草性高，特异性强，能(néng)测出少量抗原和抗体，所以应用范围较广。