麦氏比浊管估计悬液中的细菌浓度

        在我们日常吃拿的微生物检测工作和進(jìn)行的某些实验中，經(jīn服海g)常會(huì)遇到(dào)需要紅紙预估细菌悬液的细菌浓度问题，有時(shí)候唱北我们需要精确计数细菌菌液浓度，會(huì)用到(dào)血球计数板来進中拍(jìn)行计数；但有時(shí)我綠司们只需要一个比较粗略的估计值即可，這路很(zhè)裡(lǐ)小编推荐大家使用計分麦氏比浊法。

麦氏比浊管是McFarland發(fā)明的一種(zhǒng)用于微生物跳請比浊的不同浊度的标准浊度管。具体的配制方法是根据硫酸和氯化钡家文的比例来定的，有表可查，這(zhè)樣(yàng)不同比例生成(c電通héng)的硫酸钡沉淀的浓度不同，森雜且都(dōu)有定值。麦氏比浊管的配比如下：

這(zhè)是传统的麦氏比浊管的配制方法，目前也有市售的商品體銀化产品，不需要自己配制，并且還(hái)有由乳胶粒子悬浮液制成(chéng見城)的麦氏比浊管，与传统的麦氏比討信浊管相比，保存時(shí)间更長(cháng)師醫也更稳定。但麦氏比浊管具体应该怎麼(me影老)使用呢？

麦氏比浊管估计悬液中的细菌浓度具体操作方法

1、轻摇标准试管。

2、无菌操作將(jiāng)被(bèi)测火年定的肉汤培养物加到(dào)与标准管相同直径（大小）的无菌试管中。

3、以无菌操作向(xiàng)被(bèi)测定试管加黃影入无菌生理盐水（NaCl），直到(dào)浓度与中笑所要求的标准管的浓度相同。

4、直接用眼睛看（需要經(jīng)验，误差较大）。

5、找张白纸，打上平行直线，然後(hòu)观察读数（如图示，利用光在不同浓知照度液体折射不同）。

例如，需配大约100cfu/mL 的细菌菌液浓度：

1. 无菌操作用接種(zhǒng)环挑取测试细菌的纯培养物到(dào)盛請放有一定量无菌生理盐水管中，混悬。

2. 以比色卡作为背景目测，直到(dào)浊度与0.5 麦氏比浊标個工准管的浊度相一致，如上图所示。

3. 0.5 号麦氏浊度标准管相当于1×108CFU/mL 浓度，照內以此为参照值，取1mL 浊度跟0.5 号麦氏浊度标准業訊管相一致的菌悬液到(dào)9mL 无麗門菌生理盐水管中，作10 倍梯度稀释1上頻07、106、105……，102 稀释度含菌量大约为100cf對去u/mL。

注：1. 测试菌的纯培养物可以是冻干菌株复苏大多後(hòu)纯培养物。

       2.本日司法仅供细菌液浓度的粗略计算。

注意事(shì)项：

1、如果测定的肉汤培养物不澄清，由培养物的值减去未海外接種(zhǒng)培养基的值来校正细菌浓度。

2、如果肉汤颜色很深，把未接種(zh明大ǒng)试管放在标准管的後(hòu)面(miàn)读数即可。

3、测定好(hǎo)的细菌，可以做一下梯南靜度稀释涂布计数。

4、此種(zhǒng)方法测定的准确性不是很高，如果是對(duì)细菌数量要到中求较精确的，请用紫外分光光度计。

5、麦氏比浊液应放室温暗处保存，用前混匀，有效期为6个月。应用時(shí)为了山刀准确也可以使用比浊仪但一定要防止麦氏浊度标准管未摇匀或已過(g相志uò)期失效。

在微生物學(xué)检验中，麦鐘雪氏比浊法常作为细菌鉴定、实验配制菌液時(shí)大致判断细菌菌液浓度的一廠老種(zhǒng)方法，通常认为，麗喝如將(jiāng)配细菌菌液浓度配成(chéng)店和0.5麦氏比浊管時(shí)，相当于1.0&tim到見es;108细菌数/ml，由于方法本身就(jiù近呢)是一種(zhǒng)估计的方法，所以尽管不同细菌大小差异很大，但除拍視了真菌孢子，细菌的差别不大，结果不會(huì)有影响。

附孢子菌悬液制作方法：

1. 菌種(zhǒng)活化

將(jiāng)保藏菌接種(z高我hǒng)在PDA斜面(miàn)培养基试管中，培养7d～14作熱d，使生成(chéng)大量孢子。未制备孢子悬液少時時(shí)，不得拔去棉塞。每打開(kāi)1支只供制备1次悬液，微電每次制备孢子悬液必须使用新培养的霉菌孢子。

2. 孢子悬液制备

在上述PDA斜面(miàn)培养基中加入少量无菌蒸馏水，用无菌接種(zhǒn遠學g)环轻轻刮取表面(miàn)的新鲜霉菌孢子，將(jiāng)孢子悬液置于2到舞50mL锥形瓶内，然後(hòu)煙開注入40mL洗脱液。

锥形瓶中加入直径5mm的玻璃珠10粒～15粒做文与孢子混合，具塞後(hòu)置水浴振荡票老器中不断振荡使成(chéng)团的孢子散開(kāi)，然後(h物的òu)用单层棉纱布過(guò)滤以除去菌丝。將(jiāng)其装入灭兒煙菌离心管中，用离心机分离沉淀孢子，去上清液。再山林加入40mL洗脱液，重复离心操作3次。制成(c做腦héng)浓度为(0.8～1.2)×街劇106spores/mL的霉菌孢子悬液。若需要精确计数，则可以用改良請白察氏液体培养基稀释孢子悬液，用血球计数板计数。孢子悬液应間通在当天使用，若不在当天使用应在 3℃～7地大℃保存，并尽量在4d内使用。