产品名称:2×Fast Pfu Master Mix(小錢Quick Load)
中文名称:2倍快速Pfu梅预混液(Quick Loa現遠d)
产品编号与包装规格:
编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 产品价格 |
HKE035-02B | 2×Fast Pfu Master Mix(Quick Loa吃坐d) | 1ml×5 | 2倍快速Pfu梅预混液 | 1505 |
产品描述:本制品是將(jiāng)PCR反应所需的Fast Pfu梅、dNTPs、M關司gCl2、反应缓冲夜以及优化剂以及稳定好人剂,预先配制成(chéng)2倍浓度的混合物。2×Fast Pfu 房紙Master Mix专为扩增克龙DNA片段优化,問廠高保真,错误率仅为1.3×10-6。西煙使用時(shí)只需在加入模板和引物并稀释到(dà中去o)1倍浓度即可進(jìn)行PCR反冷不应,非常方便。较普通Pfu梅,2×Fast Pfu M吧藍aster Mix具有快速、高灵敏度、抗干扰强等特点,能(n窗們éng)获得更理想的扩增结果, 并大幅度缩短扩增反应時(shí)间,非常适用土舊于1-20kb長(cháng)片姐白段的扩增。
产品特点:
高保真:具有同Pfu梅相同的保真度,为普通Taq酶的50倍。
灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。
快速高效:Fast Pfu扩增書不速度为普通Pfu梅的数倍,72℃保温30 秒可延伸村村1kb以上,可在较短時(shí)间煙我内获得高产量的PCR产物(图例一)。
快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即公離可完成(chéng)反应体系配制笑姐。
产品用途:用于要求保真度比较高,扩增長(cháng)度较長個花(cháng)的PCR反应,包括克龙PCR、DNA片段拼接放道、引入突变、全基因合成(chéng)等。
使用建议:(Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为是藍平滑末端,无3′端"A" 突出,除使用环凯PCR一步定向(xiàng)克龙试剂制中盒(Cat. No: HKNR001) 外,其它拿愛PCR产物的克龙方案有:)
1)PCR前引物進(jìn)行5′端加磷學志修饰或將(jiāng)PCR产物麟酸化处理後(hòu)再直道票接克龙于平滑末端的载体中。
2)將(jiāng)产物3′末端加A後(hòu)再与T载体连接。
3)由于Fast Pfu DNA聚要會合酶的校對(duì)活性可引起(qǐ)引物从3′端被(bè動做i)部分降解。因此在设计引物時(shí)应适当光分增加引物的長(cháng)度, 理想的引物長(cháng)度为20-30mer線你s。另外为了减少由3′→5′外切酶活性引起(qǐ)的引物站媽降解,尽量在冰上配制反应体系。
应用实例:图例一)50μL 扩增体系中,λDNA 为模板, 扩增 1kb~2輛外0kb 片段。
泳道(dào) M:λ/Hind III DNA身雜Marker;
泳道(dào) 1:1kb;
泳道(dào) 2:2kb;
泳 道(dào) 3:4kb;
泳 道(dào) 4:6kb;
泳道(dào) 5:8kb;
泳道(dào) 6:10kb;
泳道(dào) 7:12kb;
泳道(dào) 8:20kb。
保存温度:-20℃。
产品包装(A 包装):
质量保证:經(jīng)检测无外源核酸酶残留;qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残拿老留;能(néng)有效扩增人基因组中的单拷贝基因。
常用反应体系(50μL):
常用PCR 循环:
注意事(shì)项:
1)需溶解*後(hòu)使用,防止离子浓度不美輛均匀。
2)對(duì)高GC含量模板,建议將(jiāng)变性温度見章提高到(dào)98℃。
3)對(duì)于高GC模板,建议配套使用PCR万neng增强剂 I(Ca員空t.No: HKE055)或者添加终浓度为5%-8% DMSO。購科