产品名称:2×Fast Pfu Master Mix(Quick Load)短雜
中文名称:2倍快速Pfu梅预混液(Quick Lo地山ad)
产品编号与包装规格:
编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 产品价格 |
HKE035-02A | 2×Fast Pfu Master Mix(哥呢Quick Load) | 1ml | 2倍快速Pfu梅预混液 | 309 |
产品描述:本制品是將(jiāng)PCR反应所需的Fast Pfu梅、dNTP站快s、MgCl2、反应缓冲夜以及优化剂以及稳定剂,预先配制成(chéng熱熱)2倍浓度的混合物。2×Fast P弟視fu Master Mix专为扩增克龙DNA片段优化場購,高保真,错误率仅为1.3×10-6。使用時(sh錯上í)只需在加入模板和引物并稀释民近到(dào)1倍浓度即可進(jìn)行PCR反应,非常家路方便。较普通Pfu梅,2×Fast Pf場舊u Master Mix具有快速、新老高灵敏度、抗干扰强等特点,能(néng)获得更理想的扩增结果, 并大幅度廠小缩短扩增反应時(shí)间,非常适用于1-20kb長(些林cháng)片段的扩增。
产品特点:
高保真:具有同Pfu梅相同的保真度,为普通Ta藍知q酶的50倍。
灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因知銀片段。
快速高效:Fast Pfu扩增速度为普通Pfu梅的数倍,72℃化放保温30 秒可延伸1kb以上,可在较短時(shí)间商日内获得高产量的PCR产物(图例一)。
快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成(ché吃機ng)反应体系配制。
产品用途:用于要求保真度比较高,扩增長(cháng)度较長(chá音筆ng)的PCR反应,包括克龙PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基務房因合成(chéng)等。
使用建议:(Fast Pfu DNA聚合酶产生吧光的PCR产物为平滑末端,无3′端"A" 到快突出,除使用环凯PCR一步定向(器年xiàng)克龙试剂盒(Cat. No: HKNR001) 外草開,其它PCR产物的克龙方案有:)
1)PCR前引物進(jìn)行5′端加磷鐵從修饰或將(jiāng)PCR产物麟酸化处理河小後(hòu)再直接克龙于平滑末端的载体中。
2)將(jiāng)产物3′末端加A後(hòu)再与T男林载体连接。
3)由于Fast Pfu DNA聚合酶的校對(duì)活性可引起(qǐ)工海引物从3′端被(bèi)部分降解。因此在劇他设计引物時(shí)应适当增加引物的長(cháng)度, 理想的引很還物長(cháng)度为20-30mers兒間。另外为了减少由3′→5′外切酶活性引起(qǐ)的引物降解,尽量在冰上配制反來路应体系。
应用实例:图例一)50μL 扩增体系中,我外λDNA 为模板, 扩增 1kb~20kb 片段。
泳道(dào) M:λ/Hind睡睡 III DNAMarker;
泳道(dào) 1:1kb;
泳道(dào) 2:2kb;
泳 道(dào) 3:4kb;
泳 道(dào) 4:6kb;
泳道(dào) 5:8kb;
泳道(dào) 6:10kb;
泳道(dào) 7:12kb;
泳道(dào) 8:20kb。
保存温度:-20℃。
产品包装(A 包装):
质量保证:經(jīng)检测无外源核酸酶残留;qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留風厭;能(néng)有效扩增人基因组中的单拷贝基因。
常用反应体系(50μL):
常用PCR 循环:
注意事(shì)项:
1)需溶解*後(hòu)使用,防止离子浓度不均匀。可北
2)對(duì)高GC含量模板,建议將(jiāng)变性温度提些熱高到(dào)98℃。
3)對(duì)于高GC模板,建议配套使用PCR万ne我通ng增强剂 I(Cat.No: HKE055)或者添加终浓度为5%-服農8% DMSO。