产品名称:Fast Pfu DN土麗A Polymerase(with d街秒NTP)
中文名称:快速Pfu DNA聚合酶(with dNTP)
产品编号与包装规格:
编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 产品价格 |
HKE031-01A | Fast Pfu DNA Pol跳間ymerase(with dNTP) | 250U | 快速Pfu DNA聚合酶 |
产品描述:本制品是通過(guò)采用分子進(jìn)化技錢水术對(duì)普通Pfu梅進(jìn)行改造而也生获得的 新型Fast Pfu梅,是新一代的高來醫保真DNA聚合酶。该酶解决了高保真PCR反应中Pfu梅扩增灵敏度低、通視延伸速度缓慢的难题,能(néng)够高效、快速扩增≤6kb片段目的基因片段遠空(樶長(cháng)可达20kb),模森秒板低至0.05ng, 并且在DNA末端补平、全基因合成(chéng)服街、引入突变等之中有著(zhe)很好(hǎo)的应用畫大。
产品特点:
&nbs物地p; 高保真:保真很船度高于Pfu梅,为普通Taq酶的50倍。
快討月速高效:Fast Pfu扩增速度为普通Pf西費u梅的数倍,72℃保温30秒可延伸1k快歌b以上。扩增長(cháng)度可达20kb,拿什能(néng)高效扩增≤6kb片段。
相長 高灵敏生風:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出1.2kb特定農劇基因片段,扩增性能(néng)显著优于普通Pfu梅。
&nb區術sp;*配方的 5×Buffer:使PCR 扩增反应更加稳定、灵敏、體長高效。
产品用途:用于要求保真度比较高的PCR反应是紙,包括克龙PCR、DNA片段拼歌妹接、引入突变、全基因合成(chéng)、DNA末端补平等,也用于复杂模板,行話 高GC/AT 模板的扩增。
使用建议:(Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平末端,无3′端"A"議線突出, 除使用环凯PCR一步定向(xiàng)克龙试剂盒區習(Cat. No: HKNR001)外, 其它PCR 产物的克龙方案有:學科)
1)生動PCR前引物進(jìn)行5′端加磷修饰或什時將(jiāng)PCR产物麟酸化处理後(hòu)再直接克龙于平末端的载体得子中。
&nbs站科p; 2)將(jiāng)产物3′末端加A鐘妹後(hòu)再与T载体连接。
&媽事nbsp; 3)由于Fast 又場Pfu DNA聚合酶的校對(duì)活性可還哥引起(qǐ)引物从3′端被(bèi)部分降解。因此在设道村计引物時(shí)应适当增加引物的長(cháng)度,理想去刀的引物長(cháng)度为20~3科影0mers。另外为了减少由3′→5′外切酶活性引起(qǐ)的引物降解,尽量在冰笑好上配制反应体系,并樶後(hòu)加入Fast Pf訊這u DNA聚合酶。
应用实例:图例一)50μL 扩增体系中,λDNA 为模板,扩增 1kb~20姐服kb 片段。
泳道(dào) M:λ/Hind III DNA Marker;&木刀nbsp;
泳道(dào) 1:1kb;
泳道(dào) 2:2kb;
泳道(dào) 3:4kb;
泳道(dào) 4:6kb;
泳道(dào) 5:8kb;
泳道(dào) 6:10kb;
泳道(dào)7:12kb;
泳道(dào) 8:20kb
保存温度:-20℃。
产品包装(A 包装):
活性定义:在74℃条件下,30 分钟内催化 10nmol dN農近TPs 掺入反应成(chéng)为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。。
常用反应体系(50μL):
常用PCR 循环:
注意事(shì)项:
 生做; 1)對(duì)高 G討錯C 含量模板,建议將(jiāng)变性温度提高到(現可dào) 98℃。
&nbs海商p; 2農草)對(duì)于高 GC 模板,建议配套使對好用 PCR 增强剂 I(Cat. No: H林快KE050)和 PCR 增强剂 II(C多算at. No: HKE051),或司習者添加终浓度为 5%-8% DMSO。