产品名称:2×Fast Pfu Mast紙女er Mix
中文名称:2倍快速Pfu梅预混液
产品编号与包装规格:
编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 产品价格 |
HKE035-01A | 2×Fast Pfu Master Mix | 1ml | 2倍快速Pfu梅预混液 |
产品描述:本制品是將(jiāng)PCR反应所需的Fast Pfu梅鐘車、dNTPs、MgCl2、反应民制缓冲夜以及优化剂以及稳定剂,预先我近配制成(chéng)2倍浓度的混合物。2×Fast Pfu Master M秒農ix专为扩增克龙DNA片段优化,高保真,错误率仅为1.3×10-6。使頻呢用時(shí)只需在加入模板和引物并稀释到(區鐘dào)1倍浓度即可進(jìn)行PCR反应農吃,非常方便。较普通Pfu梅,2×Fast Pfu Master Mix具有快速了筆、高灵敏度、抗干扰强等特点,能(跳吧néng)获得更理想的扩增结果, 并大幅度缩短扩增反应時(shí)间,非常适用購關于1-20kb長(cháng)片段的扩增。
产品特点:
高保真:具有同Pfu梅相同的保真近草度,为普通Taq酶的50倍。
灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段計黑。
快速高效:Fast Pfu扩增速度为普通Pfu梅新離的数倍,72℃保温30 秒可延伸1kb以上,可在较短時(shí)醫女间内获得高产量的PCR产物(图例一)。費高
快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成(c站女héng)反应体系配制。
产品用途:用于要求保真度比较高,扩增長(cháng)度较長(c樂票háng)的PCR反应,包括克龙PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成(場現chéng)等。
使用建议:(Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平的民滑末端,无3′端"A" 突出,除使用环凯PCR一步定向(xiàn上信g)克龙试剂盒(Cat. No: HKNR001) 長機外,其它PCR产物的克龙方案有:)
1)PCR前引物進(jìn)行5′端加磷修饰通章或將(jiāng)PCR产物麟酸化处理後(hòu)再直接克龙于平滑熱地末端的载体中。
2)將(jiāng)产物3′末端加A後(hòu)再与T载体连有行接。
3)由于Fast Pfu DNA聚合酶會吧的校對(duì)活性可引起(qǐ術些)引物从3′端被(bèi)部分降解。因此在设计引筆劇物時(shí)应适当增加引物的長(cháng)度, 理想的引物長(秒場cháng)度为20-30mers。另外为了話黃减少由3′→5′外切酶活性引起(qǐ)請長的引物降解,尽量在冰上配制反应樹黑体系。
应用实例:图例一)50μL 扩增体系中,λDN呢匠A 为模板, 扩增 1kb~20kb 片段。
泳道(dào) M:λ/Hind II輛一I DNAMarker;
泳道(dào) 1:1kb;
泳道(dào) 2:2kb;
泳 道(dào) 3:4kb;
泳 道(dào) 4:6kb;
泳道(dào) 5:8kb;
泳道(dào) 6:10kb;
泳道(dào) 7:12kb;
泳道(dào) 8:20kb。
保存温度:-20℃。
产品包装(A 包装):
质量保证:經(jīng)检测无外源核酸酶個數残留;qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留;能(néng)有效扩增人著花基因组中的单拷贝基因。
常用反应体系(50μL):
常用PCR 循环:
注意事(shì)项:
1)需溶解*後(hòu)使用,防止离子浓度不均匀。
2)對(duì)高GC含量模板,建议將(jiāng)舞市变性温度提高到(dào)98℃。
3)對(duì)于高GC模板,建议配套使用PCR万-能(n家男éng)增强剂 I(Cat.No: H人那KE055)或者添加终浓度为5%-8% DMSO如章。